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本制品提供了4种不同的GC-rich PCR Buffer，为扩增高GC含量的DNA片段提供了多种不同的选择，大大提高了高GC含量DNA片段的扩增成功率。可以适用于各种常见的耐热DNA聚合酶例如Taq DNA polymerase、Pfu DNA polymerase等。

各种GC-rich PCR Buffer可以单独使用，也可以组合使用。这样可以在更多条件下优化PCR条件。提供了推荐的几种经过优化的GC-rich PCR Buffer的组合方式，便于用户直接选用。

根据相关文献报道，单一的GC-rich PCR Buffer对于某一个高GC含量的DNA片段的扩增效果很好，但对于另外一个高GC含量的DNA片段则很可能会扩增效果不太理想。正因为很难采用一种通用的GC-rich PCR Buffer完成对于不同的高GC含量DNA片段的扩增，因此对于高GC含量DNA片段的扩增一直是分子生物学操作过程中的一个难点。针对这一实际情况，百奥莱博推出了可以给予用户多种条件进行优化组合的4管套装GC-rich PCR Buffer。

• 在使用本试剂盒提供的GC-rich PCR Buffer的同时，必须同时使用和DNA聚合酶配套的最终浓度为1X的含镁离子PCR Buffer。
  
• 由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在操作时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。

• PCR反应参数的设置也可以参考特定的耐热DNA聚合酶的说明进行。通常对于扩增高GC含量DNA片段的情况，延伸时间可以比常规的延伸时间适当延长一些。
  
• PCR反应体系的设置可以参考特定的耐热DNA聚合酶进行，仅仅添加适量本试剂盒所提供的GC-rich PCR buffer即可。可以参考如下反应体系设置PCR反应：
  

  成分	终浓度	50μL体系	20μL体系
  双蒸水或Milli-Q水	-	(26.75-x)μL	(10.7-y)μL
  10×PCR Buffer (with Mg2+)	1×	5μL	2μL
  5×GC-rich Buffer	1X	10μL	4μL
  dNTP (2.5mM each)	0.2mM each	4μL	1.6μL
  模板DNA	10pg～1μg*	x μL	y μL
  引物混合物(10μM each)	0.8μM	4μL	1.6μL
  Taq DNA Polymerase (5U/μl)	1.25U/50μL	0.25μL	0.1μL
  总体积	-	50μL	20μL

  
  
• 也可以尝试采用0.5×GC-rich Buffer：
  

  成分	终浓度	50μL体系	20μL体系
  双蒸水或Milli-Q水	-	(31.75-x)μL	(12.7-y)μL
  10×PCR Buffer (with Mg2+)	1×	5μL	2μL
  5×GC-rich Buffer	0.5×	5μL	2μL
  dNTP (2.5mM each)	0.2mM each	4μL	1.6μL
  模板DNA	10pg～1μg*	x μL	y μL
  引物混合物(10μM each)	0.8μM	4μL	1.6μL
  Taq DNA Polymerase (5U/μl)	1.25U/50μL	0.25μL	0.1μL
  总体积	-	50μL	20μL

  
  
• 还可以尝试在PCR反应体系中同时含有2～4种不同的1×GC-rich Buffer或0.5×GC-rich Buffer。以形成不同的组合用于优化PCR反应条件。优先推荐的GC-rich Buffer及其组合(最终浓度)包括：
  
  • 1×GC-rich Buffer A
    
  • 1×GC-rich Buffer B
    
  • 0.5×GC-rich Buffer B
    
  • 1×GC-rich Buffer C
    
  • 2×GC-rich Buffer C
    
  • 1×GC-rich Buffer C + 1×GC-rich Buffer D
    
  • 2×GC-rich Buffer C + 1×GC-rich Buffer D
    
  • 1×GC-rich Buffer C + 0.2×GC-rich Buffer B
    
  • 2×GC-rich Buffer C + 0.2×GC-rich Buffer B
• 可以根据初步的PCR扩增效果，再对效果较好的GC-rich Buffer再进行优化组合，进一步优化GC-rich Buffer的组合。最后根据PCR反应的扩增效果，选择最佳的GC-rich PCR buffer或其组合。